管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試

在現(xiàn)代醫(yī)療領(lǐng)域，管腔器械(如內(nèi)鏡、導(dǎo)管、腹qiang鏡等)的清洗消毒質(zhì)量直接關(guān)系到患者安全和醫(yī)療效果。這類(lèi)器械由于其復(fù)雜的內(nèi)部結(jié)構(gòu)(細(xì)長(zhǎng)管腔、彎曲通道、盲端等)，容易成為生物負(fù)荷殘留的“重災(zāi)區(qū)"。數(shù)據(jù)顯示，約 15% 的醫(yī)院感染事件與醫(yī)療qi械清洗不che底直接相關(guān)，其中管腔器械的清洗合格率僅為 78.3%，顯著低于普通器械的 92.5%(數(shù)據(jù)來(lái)源：《中國(guó)感染控制雜志》2024 年第 3 期)。多酶清洗劑作為去除有機(jī)污染物(血液、組織液、黏液等)的核心試劑，其在管腔內(nèi)部的穿透能力和清洗效果，成為衡量清洗質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。

管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試，正是針對(duì)這一痛點(diǎn)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)業(yè)檢測(cè)項(xiàng)目。它通過(guò)模擬臨床使用場(chǎng)景，評(píng)估清洗劑在不同材質(zhì)、不同管徑、不同長(zhǎng)度的管腔器械內(nèi)的流動(dòng)特性、活性成分分布及污染物去除效率，為清洗劑的研發(fā)、選型和臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。目前，該測(cè)試已被納入《醫(yī)院消毒供應(yīng)中心第 3 部分：清洗消毒及滅菌效果監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)》(WS 310.3 - 2016)的強(qiáng)制監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，足見(jiàn)其在醫(yī)療安全體系中的重要地位。

管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試的核心檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與方法

一、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)體系

嚴(yán)格遵循國(guó)內(nèi)外權(quán)wei標(biāo)準(zhǔn)，確保檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性和可比性：

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：

WS 310.3 - 2016：明確規(guī)定管腔器械清洗效果的監(jiān)測(cè)方法，要求對(duì)內(nèi)徑 ≤ 1mm 的器械進(jìn)行專(zhuān)門(mén)的穿透性能評(píng)估。

GB 27950 - 2011《手和皮膚消毒效果的測(cè)試方法》：雖主要針對(duì)皮膚消毒，但其中的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)方法被借鑒用于管腔污染物去除效率的測(cè)定。

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：

ISO 15883 - 4:2006《yi用清xi消毒器 第 4 部分：對(duì)管腔器械清洗效果的測(cè)試》：提供了管腔穿透測(cè)試的詳細(xì)流程，包括管腔模型的規(guī)格、污染物的制備、清洗劑濃度的選擇等。

EN 13060:2012《小型蒸汽滅菌器》：附錄 C 中關(guān)于管腔器械滅菌前清洗效果的驗(yàn)證方法，為穿透測(cè)試的污染物模擬提供參考。

行業(yè)規(guī)范：

《內(nèi)鏡清xi消毒技術(shù)操作規(guī)范（2022 年版）》：要求內(nèi)鏡清洗時(shí)必須使用符合穿透性能要求的多酶清洗劑，并定期進(jìn)行效果監(jiān)測(cè)。

二、核心檢測(cè)方法

采用模擬管腔模型法，通過(guò)構(gòu)建不同規(guī)格的人工管腔，模擬臨床器械的復(fù)雜結(jié)構(gòu)，具體步驟如下：

管腔模型制備：

材質(zhì)：選用與臨床器械一致的材料，如不銹鋼(304 或 316L)、聚四氟乙烯(PTFE)、硅膠等。

規(guī)格：根據(jù) WS 310.3 - 2016 要求，至少包含以下三種模型：

直管模型：內(nèi)徑 1mm、長(zhǎng)度 500mm

彎曲模型：內(nèi)徑 2mm、長(zhǎng)度 300mm、彎曲角度 90°(曲率半徑 15mm)

分支模型：內(nèi)徑 3mm、主長(zhǎng)度 400mm、分支長(zhǎng)度 100mm(分支角度 45°)

內(nèi)壁處理：部分模型進(jìn)行噴砂或電解蝕刻，模擬使用后的器械內(nèi)壁粗糙度(Ra 值 1.6 - 3.2μm)。

污染物制備與負(fù)載：

標(biāo)準(zhǔn)污染物：按照 ISO 15883 - 4 配方，由 80% 新鮮豬全血(抗凝處理)、15% 牛血清白蛋白、5% 干燥人血紅蛋白混合而成，蛋白質(zhì)濃度控制在 65 - 75g/L。

負(fù)載方法：使用微量zhu射泵將污染物均勻注入管腔模型，每 cm2 內(nèi)壁面積負(fù)載 0.1mL 污染物，37℃ 烘干 2h 形成干涸污染物層。

清洗與穿透測(cè)試流程：

清洗劑配制：按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)推薦濃度(通常 0.5 - 2.0%)，用 30 - 40℃ 去離子水配制測(cè)試溶液，pH 值調(diào)節(jié)至 7.0 - 8.0(中性多酶清洗劑)。

清洗方式：

浸泡法：將管腔模型wan全浸入清洗劑溶液，30℃ 靜置 5min，模擬手工清洗浸泡過(guò)程。

沖洗法：使用蠕動(dòng)泵以 20mL/min 流速將清洗劑溶液連續(xù)沖洗管腔，持續(xù) 2min，模擬清洗機(jī)噴淋過(guò)程。

超聲輔助法：若產(chǎn)品宣稱(chēng)超聲適用性，需在 40kHz 超聲清洗槽中進(jìn)行，功率密度 0.3W/cm2。

穿透效果評(píng)估：

采樣點(diǎn)設(shè)置：在管腔模型的入口端、中段、末端及彎曲/分支處設(shè)置采樣口，收集清洗后的殘留液。

殘留蛋白質(zhì)測(cè)定：采用考馬斯亮藍(lán)法(Bradford 法)，使用紫外分光光度計(jì)(如島津 UV - 2600)在 595nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算殘留蛋白質(zhì)濃度(檢測(cè)限 0.01mg/mL)。

酶活性分布測(cè)定：通過(guò)熒光底物法(如 Boc - Val - Leu - Lys - AMC)，檢測(cè)管腔不同位置清洗劑的蛋白酶活性，反映活性成分的穿透均勻性。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：

殘留蛋白質(zhì)：管腔末端殘留蛋白質(zhì)濃度應(yīng) ≤ 0.1mg/mL，且與入口端殘留量比值 ≥ 0.8(表明穿透均勻)。

酶活性：管腔各采樣點(diǎn)的酶活性變異系數(shù)(CV)應(yīng) ≤ 20%。

污染物去除率：總?cè)コ?1 - 殘留蛋白質(zhì)總量/初始負(fù)載量)應(yīng) ≥ 99.5%。

對(duì)儀器設(shè)備的精度和穩(wěn)定性要求ji高，核心設(shè)備包括：

一、管腔模型制備與負(fù)載設(shè)備

精密車(chē)床與銑床：用于加工不同規(guī)格的金屬管腔模型，保證內(nèi)徑公差 ± 0.05mm，如哈斯 ST - 10 數(shù)控車(chē)床。

內(nèi)壁粗糙度儀：如泰勒霍普森 Surtronic S - 100.用于測(cè)量管腔內(nèi)壁 Ra 值，確保模擬真實(shí)性。

微量zhu射泵：如 Harvard Apparatus PHD 2000.精度 0.1μL/min，實(shí)現(xiàn)污染物的均勻負(fù)載。

二、清洗與穿透測(cè)試設(shè)備

恒溫水浴槽：如 Thermo Scientific HAAKE DC10.控溫精度 ± 0.1℃，維持清洗劑溫度穩(wěn)定。

蠕動(dòng)泵與注射泵：

蠕動(dòng)泵：如 Watson - Marlow 323DU，流速范圍 0.001 - 100mL/min，用于管腔沖洗。

注射泵：如 KD Scientific Legato 100.用于精準(zhǔn)控制清洗劑流量和壓力。

超聲清洗機(jī)：如 Branson CPX - 952 - 814R，頻率 40kHz，功率可調(diào)，模擬超聲清洗條件。

管腔采樣裝置：定制的多通路采樣閥，可在不拆卸模型的情況下采集管腔不同位置的殘留液。

三、分析與檢測(cè)設(shè)備

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：如島津 UV - 2600.配備微量比色皿(100μL)，用于蛋白質(zhì)濃度測(cè)定。

熒光分光光度計(jì)：如 PerkinElmer LS 55.激發(fā)波長(zhǎng) 380nm，發(fā)射波長(zhǎng) 460nm，用于酶活性檢測(cè)。

高效液相色譜儀（HPLC）：如 Agilent 1260 Infinity，配備 C18 色譜柱(5μm，4.6×250mm)，用于分析清洗劑中活性成分的濃度分布(如蛋白酶、淀fen酶等)。

生物顯微鏡：如 Olympus BX53.配備微分干涉相差(DIC)裝置，觀察管腔內(nèi)壁污染物殘留形態(tài)。

四、質(zhì)量控制設(shè)備

電子天平：如 Mettler Toledo XS205DU，精度 0.1mg，用于污染物和清洗劑的精確稱(chēng)量。

pH 計(jì)：如 Sartorius PB - 10.精度 ± 0.01pH，監(jiān)測(cè)清洗劑溶液的酸堿度。

conductivity meter：如 Metrohm 712 Conductometer，測(cè)定清洗劑溶液的電導(dǎo)率，間接反映濃度均勻性。

管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試的關(guān)鍵指標(biāo)與結(jié)果分析

一、關(guān)鍵檢測(cè)指標(biāo)

管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試的核心指標(biāo)可分為物理穿透指標(biāo)和化學(xué)/生物效果指標(biāo)兩大類(lèi)：

物理穿透指標(biāo)：

穿透時(shí)間：清洗劑溶液從管腔入口端到達(dá)末端的時(shí)間，直管模型應(yīng) ≤ 10s，彎曲模型應(yīng) ≤ 20s。

流動(dòng)均勻性：通過(guò)壓力傳感器(如 Honeywell ASCX系列)監(jiān)測(cè)管腔不同位置的壓力降，變異系數(shù)應(yīng) ≤ 15%。

泡沫殘留量：按照 ASTM D1173 - 21 方法，測(cè)定清洗后管腔內(nèi)的泡沫高度，應(yīng) ≤ 5mm(避免影響后續(xù)消毒滅菌)。

化學(xué)/生物效果指標(biāo)：

殘留蛋白質(zhì)濃度：前文已詳述，是評(píng)估污染物去除效果的直接指標(biāo)。

酶活性保留率：管腔末端清洗劑的酶活性與初始溶液活性的比值，應(yīng) ≥ 85%(表明活性成分未被管腔吸附或降解)。

ATP 生物負(fù)荷：使用 ATP 生物熒光檢測(cè)儀(如 3M Clean - Trace NG3)，檢測(cè)管腔殘留的 ATP 含量，應(yīng) ≤ 10RLU(相對(duì)光單位)。

模擬生物膜去除率：對(duì)于宣稱(chēng)抗生物膜功能的產(chǎn)品，需采用銅綠假單胞菌(PAO1 株)生物膜模型，通過(guò)平板計(jì)數(shù)法測(cè)定去除率，應(yīng) ≥ 99.9%。

二、典型結(jié)果分析與案例

案例：某品牌中性多酶清洗劑的穿透測(cè)試

測(cè)試條件：

管腔模型：不銹鋼直管(1mm×500mm)、硅膠彎曲管(2mm×300mm，90°彎曲)

清洗劑濃度：1.0%，溫度 35℃

清洗方式：蠕動(dòng)泵沖洗(20mL/min，2min)

測(cè)試結(jié)果：

結(jié)果分析：

該產(chǎn)品在直管和彎曲模型中均符合判定標(biāo)準(zhǔn)，殘留蛋白質(zhì)和 ATP 含量較低，表明穿透效果良好。

彎曲模型末端的殘留蛋白質(zhì)略高于入口端(0.07 vs 0.05mg/mL)，可能與彎曲處湍流效應(yīng)導(dǎo)致污染物剝離難度增加有關(guān)，建議在臨床使用時(shí)適當(dāng)延長(zhǎng)彎曲管腔的沖洗時(shí)間。

酶活性保留率均 ≥ 85%，說(shuō)明該產(chǎn)品的活性成分在管腔內(nèi)的穩(wěn)定性較好，未發(fā)生顯著吸附或失活。

常見(jiàn)不合格情況及原因分析

穿透時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（> 30s）：

可能原因：清洗劑黏度偏高(> 5mPa·s，25℃)、表面張力過(guò)大(> 40mN/m)，或管腔內(nèi)壁有油污等疏水性污染物。

改進(jìn)建議：優(yōu)化配方降低黏度(如添加低分子量表面活性劑)、預(yù)處理管腔去除疏水性污染物。

末端殘留蛋白質(zhì)超標(biāo)（> 0.1mg/mL）：

可能原因：蛋白酶活性不足(< 500U/mL)、清洗劑與管腔材質(zhì)不兼容(如硅膠對(duì)某些酶成分的吸附)。

改進(jìn)建議：提高蛋白酶濃度或選用耐吸附的酶制劑(如包裹型蛋白酶)、針對(duì)特定材質(zhì)優(yōu)化配方。

酶活性分布不均（CV > 20%）：

可能原因：清洗劑中酶成分與其他添加劑(如螯合劑)發(fā)生相互作用，或攪拌不充分導(dǎo)致局部濃度差異。

改進(jìn)建議：調(diào)整配方避免酶 - 添加劑相互作用、采用分步溶解工藝確?；旌暇鶆?。

管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試的質(zhì)量控制與注意事項(xiàng)

一、檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量控制

陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照：

陽(yáng)性對(duì)照：使用已知穿透性能良好的標(biāo)準(zhǔn)清洗劑(如美國(guó) 3M 多酶清洗劑)，同步進(jìn)行測(cè)試，確保實(shí)驗(yàn)體系有效性。

陰性對(duì)照：用去離子水代替清洗劑，驗(yàn)證污染物自然脫落率(應(yīng) ≤ 5%)。

儀器校準(zhǔn)：

紫外分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)需每日用標(biāo)準(zhǔn)溶液校準(zhǔn)(如牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品、熒光底物標(biāo)準(zhǔn)品)。

蠕動(dòng)泵、注射泵每月用稱(chēng)重法校準(zhǔn)流速(誤差 ≤ ± 2%)。

人員操作規(guī)范：

操作人員需經(jīng)過(guò) WS 310.3 - 2016 標(biāo)準(zhǔn)培訓(xùn)，熟練掌握管腔模型的裝卸和采樣技巧。

污染物負(fù)載、清洗、采樣等關(guān)鍵步驟需雙人復(fù)核，確保操作一致性。

二、樣品前處理注意事項(xiàng)

樣品保存：清洗劑樣品需在 2 - 8℃ 避光保存，測(cè)試前平衡至室溫(25℃ ± 2℃)，開(kāi)封后 24h 內(nèi)使用。

濃度驗(yàn)證：測(cè)試前需用滴定法或折光儀驗(yàn)證清洗劑濃度，確保與標(biāo)稱(chēng)值一致(偏差 ≤ ± 5%)。

pH 調(diào)節(jié)：若產(chǎn)品 pH 范圍較寬(如 6.0 - 8.5)，需用 0.1mol/L HCl 或 NaOH 精確調(diào)節(jié)至中間值(7.2 ± 0.1)，避免 pH 對(duì)酶活性的影響。

三、管腔模型的維護(hù)與管理

清潔與滅菌：每個(gè)模型使用后需用 0.5% 次氯酸鈉溶液浸泡 30min，再用去離子水沖洗至中性，121℃ 高壓滅菌 20min，避免交叉污染。

使用壽命：金屬模型使用 50 次后需重新檢測(cè)內(nèi)徑和粗糙度，硅膠模型使用 20 次后更換，確保模型狀態(tài)穩(wěn)定。

標(biāo)識(shí)管理：每個(gè)模型需編號(hào)并記錄使用次數(shù)、維護(hù)歷史，建立“一人一模型一記錄"的追溯體系。

管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試的發(fā)展趨勢(shì)與展望

隨著微創(chuàng)技術(shù)的普及，管腔器械的結(jié)構(gòu)日益復(fù)雜(如超細(xì)內(nèi)鏡、多通道介入導(dǎo)管)，對(duì)清洗劑穿透性能的要求不斷提高。未來(lái)，管腔器械多酶清洗劑穿透測(cè)試將呈現(xiàn)以下發(fā)展趨勢(shì)：

仿生模型的開(kāi)發(fā)：基于 3D 打印技術(shù)，制造更接近臨床器械真實(shí)結(jié)構(gòu)的仿生管腔模型，如帶有微溝槽、微孔的復(fù)雜模型，提高測(cè)試的臨床相關(guān)性。

實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)技術(shù)的應(yīng)用：結(jié)合光纖傳感器、微型 pH 電極等技術(shù)，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)清洗劑在管腔內(nèi)的流動(dòng)狀態(tài)和活性變化，獲得動(dòng)態(tài)穿透數(shù)據(jù)。

多污染物體系的建立：除蛋白質(zhì)外，將脂類(lèi)、糖類(lèi)、生物膜等復(fù)雜污染物納入測(cè)試體系，更全面評(píng)估清洗劑的穿透和去除能力。

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一：目前各國(guó)標(biāo)準(zhǔn)在管腔模型規(guī)格、污染物配方等方面存在差異，未來(lái)有望形成統(tǒng)一的 ISO 標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)全qiu清洗劑產(chǎn)品的質(zhì)量互認(rèn)。

作為專(zhuān)業(yè)的第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，我們將持續(xù)關(guān)注行業(yè)發(fā)展動(dòng)態(tài)，不斷優(yōu)化檢測(cè)方法和設(shè)備，為清洗劑生產(chǎn)企業(yè)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供科學(xué)、準(zhǔn)確的檢測(cè)數(shù)據(jù)，助力提升管腔器械清洗質(zhì)量，保障患者醫(yī)療安全。